Das Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) ist ein neu entdecktes magensaftresistentes porcines pathogenes Coronavirus, das bei neugeborenen Ferkeln wässrigen Durchfall verursachen und der Schweineindustrie erhebliche wirtschaftliche Verluste zufügen kann.Derzeit gibt es keine geeignete serologische Methode zur Bewertung der Wirksamkeit einer SADS-CoV-Infektion und eines Impfstoffs. Daher besteht ein dringender Bedarf an der Verwendung eines effektiven enzymgebundenen Immunadsorptionstests (ELISA), um diesen Mangel auszugleichen.Hier wurde ein rekombinantes Plasmid, das SADS-CoV-Spike (S)-Protein exprimiert, fusioniert mit menschlicher IgG-Fc-Domäne, konstruiert, um rekombinantes Baculovirus zu produzieren, und in HEK 293F-Zellen exprimiert.Das S-Fc-Protein wird mit Protein-G-Harz gereinigt und behält die Reaktivität mit Anti-Human-Fc- und Anti-SADS-CoV-Antikörpern.Dann wurde das S-Fc-Protein verwendet, um einen indirekten ELISA (S-iELISA) zu entwickeln und die Reaktionsbedingungen des S-iELISA zu optimieren.Als Ergebnis wurde durch die Analyse des OD450-nm-Werts von 40 SADS-CoV-negativen Seren, die durch Immunfluoreszenzassay (IFA) und Western Blotting bestätigt wurden, der Cut-Off-Wert auf 0,3711 bestimmt.Der Variationskoeffizient (CV) der 6 SADS-CoV-positiven Seren innerhalb und zwischen den Läufen des S-iELISA betrug alle weniger als 10 %.Der Kreuzreaktivitätstest zeigte, dass S-iELISA keine Kreuzreaktivität mit anderen Schweinevirus-Seren aufweist.Basierend auf dem Nachweis von 111 klinischen Serumproben betrug die Gesamtkoinzidenzrate von IFA und S-iELISA 97,3 %.Der Virusneutralisationstest mit 7 verschiedenen OD450nm-Werten von Serum zeigte, dass der durch S-iELISA nachgewiesene OD450nm-Wert positiv mit dem Virusneutralisationstest korreliert war.Schließlich wurde S-iELISA an 300 Serumproben von Schweinefarmen durchgeführt.Kommerzielle Kits anderer Schweine-Enteroviren zeigten, dass die IgG-Positivraten von SADS-CoV, TGEV, PDCoV und PEDV 81,7 %, 54 % bzw. 65,3 % betrugen., 6 %.Die Ergebnisse zeigen, dass der S-iELISA spezifisch, empfindlich und reproduzierbar ist und zum Nachweis einer SADS-CoV-Infektion in der Schweineindustrie eingesetzt werden kann.Dieser Artikel ist urheberrechtlich geschützt.Alle Rechte vorbehalten.
Postzeit: 22. Juni 2021